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磁性细胞分选的4个考虑因素
发布时间:2016-06-04        浏览次数:258        返回列表
 从复杂的细胞混合物中分离出特定的细胞,是研究人员经常要面对的挑战。就目前而言,三种应用最广泛的技术是:离心、荧光激活细胞分选(FACS)和磁性细胞分选。离心是最便宜的,但也最不特异,主要依靠细胞的物理特征(如密度)进行分离,而基于表型分离细胞的能力有限。

FACS和磁性细胞分选比离心要特异得多,因为这些方法利用抗体来识别目标细胞。利用FACS,细胞可根据几个抗原的表达来分离。磁性分选则仅限于1-2个抗原,但优点不少。它的平台更为简单,成本要低得多,并且处理时间也更短。也许你正跃跃欲试,那么,你需要考虑以下四个因素。

样品组成

若你了解样品混合物的组成,则意味着实验能够很好地规划和开展。对于磁性细胞分选而言,这尤为重要,因为熟悉不同的细胞群体可帮你最大限度提高分离的纯度和产量。比较两个样品的情况并不少见吧,比如,一个是对照,一个经过处理。处理后的样品可能有着不同比例的目标细胞,这意味着你需要调整试剂,才能达到类似的纯度。这同样适用于标志物上调或下调的情况。

阳性分选还是阴性分选?

磁性细胞分选有两种策略:阳性和阴性分选。简单地说,阳性分选就是选出想要的,而阴性分选就是选出不想要的,留下想要的。这个选择取决于你的特定需求,不过也需要考虑几个因素:

作为FACS之前的富集步骤。在处理复杂的细胞群体时,一种有效的方法是先阳性选择,再进行FACS。例如,对于低频率的目标如小鼠树突状细胞(DC),你可以用CD11c结合的磁珠来富集整个DC部分,再通过FACS分选出CD8+和CD11+亚群。
功能研究。在开展阳性分选时,分离出的细胞携带了分选用的磁珠,除非二次处理才能去除。在大多数情况下,这都不是问题。不过,如果磁珠有阻断或激活的性能,或者你已经发现阳性选择对你的实验读数有影响,那么阴性选择可能更适合。

计算纯度和产量

在你分选出细胞之后,你可能需要验证它的纯度和产量。纯度定义为收集到的目标细胞的比例,可通过流式细胞仪来分析。产量则定义为回收到的目标细胞相对于原始样品中目标细胞的比例。人们可能使用不同的方法来计算这一参数。有些人在将样品放入磁场前后计算目标细胞的数量,有些人则计算整个过程的产量。无论你使用哪种方法,它都报告为分选后目标细胞的数量/分选前目标细胞的数量。切记,不要使用细胞总数作为分母。

寻找纯度和产量之间的最佳平衡点

磁性分选的本质是在纯度和产量之间寻找一个最佳的平衡点。当你提高纯度,产量就会下降,反之亦然。对于阳性分选,若希望最大限度提高纯度,你可以减少磁珠的量,或增加分离次数。若希望提高产量,则增加磁珠的量,或减少分离次数。

当然,细胞分选实验还是颇有挑战性的,希望这里讨论的tips能帮助你获得最佳的结果。
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